BD 流式細胞儀在實驗前的準備工作

　　BD 流式細胞儀是集激光技術、電子物理、光電測量、計算機及細胞熒光化學技術于一體的多參數細胞分析儀器，廣泛應用于生命科學研究和臨床診斷領域。其核心功能是通過液流系統將細胞或微粒排列成單列，依次通過激光束檢測點，利用光學系統激發熒光標記物并捕獲散射光與熒光信號，最終通過電子系統將光信號轉換為數字信號進行多維度分析。

　　其液流系統由鞘液管、樣品管和噴嘴組成，通過流體動力學聚焦使細胞懸浮液形成直徑約3-10μm的穩定液柱，確保每個細胞獨立通過激光檢測區。光學系統采用氬離子激光器（488nm）或氪離子激光器（647nm），激發細胞表面或內部的熒光染料（如FITC、PE）。前向散射光（FSC）反映細胞體積，側向散射光（SSC）揭示胞內顆粒結構，而熒光信號強度則對應標記抗原或核酸的濃度。光電倍增管（PMT）將光信號轉換為電脈沖，經模數轉換后生成FCS格式數據文件。

　　BD 流式細胞儀在實驗前準備：

　　1、儀器校準與質檢

　　開機預熱：提前30分鐘開機，使激光和檢測系統穩定。

　　光路校準：使用標準熒光微球（如Flow Check或CytoGlow）調整激光延遲、靈敏度及PMT電壓，確保液流居中。

　　檢查背景噪聲：運行緩沖液（如PBS），確保散射光和熒光通道的基線平穩，無異常信號。

　　2、樣本制備

　　細胞濃度：調整細胞濃度至5×10?~1×10?cells/mL（過高易導致堵塞，過低降低檢測效率）。

　　單細胞懸液：機械法（研磨）或酶消化法（如膠原酶）處理組織，過濾去除團塊。

　　3、染色與孵育：

　　表面抗體：4℃避光孵育15~30分鐘，PBS洗滌后重懸。

　　胞內染色：破膜劑（如BD Fix&Perm）處理后孵育胞內抗體。

　　活性染料：如PI（死細胞染色）或Calcein-AM（活細胞標記）。

　　4、對照設置：

　　空白對照：未染色的細胞用于確定熒光閾值。

　　單標對照：單個熒光標記的樣本用于調整補償（Compensation）。

　　同型對照：用于排除非特異性結合（如ISO型抗體）。