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    如何操作熒光定量PCR儀?

    更新時間:2024-10-17瀏覽:304次

      熒光定量PCR儀的操作流程主要包括實驗前準備、反應體系設計、PCR反應條件設置、儀器開機與樣品放置、軟件操作與程序編輯等步驟。以下是對這些步驟的具體介紹:
      
      一、實驗前準備
      
      1、試劑準備:確保所有試劑和設備的質量良好,避免對實驗結果產生影響。準備好所需的試劑和設備,包括PCR試劑盒、引物、模板DNA或RNA樣品、PCR儀等。
      
      2、實驗室環境:在超凈工作臺上進行所有步驟,使用75%乙醇或其他去污劑擦拭工作臺,避免表面污染。進入實驗室后需要佩戴一次性無菌口罩、無菌乳膠手套,盡量避免與同事交談,防止PCR模板污染。
      
      二、反應體系設計
      
      設計反應體系:根據實驗需要設計好PCR反應體系,包括引物濃度、模板DNA或RNA濃度、試劑盒成分等。合理的反應體系設計是保證實驗成功的關鍵。
      
      三、PCR反應條件設置
      
      設定反應條件:根據所用的PCR試劑盒和目標分子的特性,設置好PCR反應的溫度、時間和循環次數等條件。合理的PCR反應條件能夠提高PCR反應的特異性和效率,減少非特異性產物的形成。
      
      四、儀器開機與樣品放置
      
      1、開啟儀器:開啟熒光定量PCR儀及其相連的電腦。點擊PCR儀上的“Eject”按鈕,放入已離心過的八連管樣品,再緩慢關閉接樣臺。
      
      2、放置樣品:將PCR反應體系加入到0.2ml低緣八聯管,蓋上管蓋;或加入低緣96孔板,用光學級封膜封好。注意,必須帶一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應管表面。將反應管按順序放入儀器的加熱孔中。
      
      五、軟件操作與程序編輯
      
      1、打開軟件:在電腦上打開與PCR儀配套的軟件,找到對應的實驗程序文件夾。根據實驗需求,選擇或編輯相應的程序。編輯過程中,確保所放樣品的地址以及信息準確無誤。
      
      2、保存程序:編輯完成后,點擊“File”選擇“Saveas”,將程序保存到相對應的文件夾中,并務必修改程序名稱(包含日期、時間等信息)。隨后,通過軟件將編輯好的程序傳出到PCR儀上。
      
      總的來說,熒光定量PCR儀的操作雖然涉及多個步驟,但只要按照規范的流程進行,就可以有效地完成實驗并獲得可靠的結果。

     

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