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    如何操作熒光定量PCR儀?

    更新時(shí)間:2024-10-17瀏覽:550次

      熒光定量PCR儀的操作流程主要包括實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備、反應(yīng)體系設(shè)計(jì)、PCR反應(yīng)條件設(shè)置、儀器開(kāi)機(jī)與樣品放置、軟件操作與程序編輯等步驟。以下是對(duì)這些步驟的具體介紹:
      
      一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
      
      1、試劑準(zhǔn)備:確保所有試劑和設(shè)備的質(zhì)量良好,避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。準(zhǔn)備好所需的試劑和設(shè)備,包括PCR試劑盒、引物、模板DNA或RNA樣品、PCR儀等。
      
      2、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境:在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行所有步驟,使用75%乙醇或其他去污劑擦拭工作臺(tái),避免表面污染。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后需要佩戴一次性無(wú)菌口罩、無(wú)菌乳膠手套,盡量避免與同事交談,防止PCR模板污染。
      
      二、反應(yīng)體系設(shè)計(jì)
      
      設(shè)計(jì)反應(yīng)體系:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)計(jì)好PCR反應(yīng)體系,包括引物濃度、模板DNA或RNA濃度、試劑盒成分等。合理的反應(yīng)體系設(shè)計(jì)是保證實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。
      
      三、PCR反應(yīng)條件設(shè)置
      
      設(shè)定反應(yīng)條件:根據(jù)所用的PCR試劑盒和目標(biāo)分子的特性,設(shè)置好PCR反應(yīng)的溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)等條件。合理的PCR反應(yīng)條件能夠提高PCR反應(yīng)的特異性和效率,減少非特異性產(chǎn)物的形成。
      
      四、儀器開(kāi)機(jī)與樣品放置
      
      1、開(kāi)啟儀器:開(kāi)啟熒光定量PCR儀及其相連的電腦。點(diǎn)擊PCR儀上的“Eject”按鈕,放入已離心過(guò)的八連管樣品,再緩慢關(guān)閉接樣臺(tái)。
      
      2、放置樣品:將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml低緣八聯(lián)管,蓋上管蓋;或加入低緣96孔板,用光學(xué)級(jí)封膜封好。注意,必須帶一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。
      
      五、軟件操作與程序編輯
      
      1、打開(kāi)軟件:在電腦上打開(kāi)與PCR儀配套的軟件,找到對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)程序文件夾。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,選擇或編輯相應(yīng)的程序。編輯過(guò)程中,確保所放樣品的地址以及信息準(zhǔn)確無(wú)誤。
      
      2、保存程序:編輯完成后,點(diǎn)擊“File”選擇“Saveas”,將程序保存到相對(duì)應(yīng)的文件夾中,并務(wù)必修改程序名稱(chēng)(包含日期、時(shí)間等信息)。隨后,通過(guò)軟件將編輯好的程序傳出到PCR儀上。
      
      總的來(lái)說(shuō),熒光定量PCR儀的操作雖然涉及多個(gè)步驟,但只要按照規(guī)范的流程進(jìn)行,就可以有效地完成實(shí)驗(yàn)并獲得可靠的結(jié)果。

     

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