要正確使用480實時熒光定量PCR系統(tǒng)，需要遵循以下步驟：

　　

　　一、前期準備

　　

　　1、檢查設備連接：確保電源線插頭已插入電源插座，且儀器與計算機及電源的連接可靠。打開電腦顯示器和主機電源開關，待電腦啟動后，進入相應的熒光定量PCR檢測系統(tǒng)界面。

　　

　　2、準備試劑和樣品：根據(jù)實驗需求，準備好所需的試劑，如模板DNA、引物、探針、Taq酶、dNTPs、Mg2+等，并按照實驗設計將它們混合均勻，配制成反應體系。同時，準備好待檢測的樣品，確保樣品的質量和濃度符合要求。

　　

　　二、設置反應程序

　　

　　1、選擇檢測模式：根據(jù)實驗目的和所使用的熒光標記類型，選擇合適的檢測模式，如SYBRGreenI模式、TaqMan探針模式等。不同的檢測模式需要設置不同的參數(shù)，如熒光激發(fā)光波長、發(fā)射光波長等。

　　

　　2、編輯反應程序：在軟件中編輯PCR反應程序，包括預變性溫度和時間、變性溫度和時間、退火溫度和時間、延伸溫度和時間以及循環(huán)次數(shù)等。這些參數(shù)應根據(jù)具體的實驗要求和所擴增的靶序列進行優(yōu)化。

　　

　　3、設定溫度梯度：如果需要優(yōu)化退火溫度或進行多重PCR反應，可以在軟件中設定溫度梯度。溫度梯度通常在一定范圍內逐漸升高或降低，以確定反應條件。

　　

　　三、加樣操作

　　

　　1、加載樣品：將配制好的反應體系加入到PCR反應管中，注意不要產生氣泡，以免影響反應效果。然后將反應管放入PCR儀的反應槽中，確保反應管放置牢固，位置準確。

　　

　　2、設置樣品信息：在軟件中輸入樣品的相關信息，如樣品名稱、編號、來源等，以便后續(xù)對實驗結果進行準確的分析和記錄。

　　

　　四、運行PCR反應

　　

　　1、啟動反應：點擊“運行”按鈕，儀器將按照設定的程序進行PCR反應。在反應過程中，可以實時觀察熒光信號的變化情況，了解反應的進展情況。

　　

　　2、監(jiān)控反應過程：密切關注PCR反應的進程，確保反應正常進行。如果出現(xiàn)異常情況，如無熒光信號增加、熒光信號過弱或過強等，應及時停止反應，檢查原因并進行調整。

　　

　　五、數(shù)據(jù)分析

　　

　　1、查看結果：PCR反應結束后，儀器會自動生成反應結果報告。在報告中，可以查看每個樣品的CT值、熒光強度等數(shù)據(jù)，以及標準曲線、擴增曲線等信息。

　　

　　2、分析方法選擇：根據(jù)實驗目的和數(shù)據(jù)特點，選擇合適的數(shù)據(jù)分析方法，如絕對定量分析、相對定量分析、基因分型分析等。然后使用軟件提供的工具對數(shù)據(jù)進行處理和分析，得到最終的實驗結果。

　　

　　正確使用480實時熒光定量PCR系統(tǒng)需要仔細的準備、精確的操作和細致的數(shù)據(jù)分析。通過遵循上述步驟，可以獲得可靠的實驗結果，為科學研究和臨床診斷提供有力支持。