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    ABI 7500熒光定量PCR儀技術(shù)中Ct值的自定義指什么?

    更新時(shí)間:2024-03-01瀏覽:3663次

      ABI 7500熒光定量PCR儀技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
      
      1.Ct值的定義
      
      在熒光定量PCR技術(shù)中,有一個(gè)很重要的概念--Ct值。C代表Cycle,t代表threshold(閾值,臨界值),Ct值的含義是:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。
      
      2.熒光閾值的設(shè)定
      
      PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào),熒光閾值的缺省設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍,即:threshold=10′SDcycle3-15
      
      3.Ct值與起始模板的關(guān)系
      
      研究表明,每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù),縱坐標(biāo)代Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。
     

    ABI 7500熒光定量PCR儀

     


     
      
      ABI 7500熒光定量PCR儀是特異性靶基因檢測(cè)與定量的一體化平臺(tái)。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測(cè)和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動(dòng)態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物逐漸增加的情況。
      
      定量PCR系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)模式采用25-100微升反應(yīng)體積,可以采用96孔板或單管/8聯(lián)管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)反應(yīng)。另外7500還可以升級(jí)為快速熱循環(huán)樣品基座,該升級(jí)為選購(gòu)件,由AB公司工程師負(fù)責(zé)安裝。快速熱循環(huán)樣品基座采用新型96孔反應(yīng)板,這種反應(yīng)板的管內(nèi)液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應(yīng)體積的實(shí)驗(yàn)。采用樣品基座升級(jí)后的7500,新型96孔反應(yīng)板和新型快速熱循環(huán)定量PCR預(yù)混試劑,實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)可以在40分鐘內(nèi)完成,實(shí)驗(yàn)效果與標(biāo)準(zhǔn)2小時(shí)模式一致。
      
      ABI 7500熒光定量PCR儀應(yīng)用廣泛,包括基于相對(duì)定量分析的基因表達(dá)分析,以標(biāo)準(zhǔn)曲線為基礎(chǔ)的病原體定量分析,定性的PCR擴(kuò)增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽(yáng)性內(nèi)對(duì)照為基礎(chǔ)的陽(yáng)性/陰性結(jié)果判定。

     

     

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